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細(xì)菌總蛋白變性提取試劑

細(xì)菌總蛋白提取試劑盒采用溫和的離子型去污劑裂解提取，無需超聲或反復(fù)凍融；加入兼容的蛋白酶抑制劑盡量保證蛋白質(zhì)的完整性；提取的蛋白質(zhì)可以用于后續(xù)FLAG、poly-His和GST標(biāo)簽蛋白的親和純化，也可以兼容許多蛋白的生化測定實驗

 操作步驟：

1. 將細(xì)菌培養(yǎng)物在預(yù)先稱重的離心管中4 ºC，5000g 離心15分鐘，收集菌體。

2. 去上清，稱量菌體重量，按照每克菌體加入10-50ml細(xì)菌蛋白抽提試劑Ⅱ（變性），渦旋震蕩使菌體*重懸。

3.  室溫孵育15-20分鐘（孵育時間可根據(jù)細(xì)胞類型的不同做調(diào)整）。

4. 15000g，離心10分鐘。

5.   將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，即得到總蛋白，可應(yīng)用BCA法進(jìn)行蛋白定量及后續(xù)實驗。

注意：

1.   該提取試劑中不含有蛋白酶抑制劑，用戶可根據(jù)具體情況添加蛋白酶抑制劑、還原劑、螯合劑等。

2.   當(dāng)提取物粘度較高或提取的蛋白以包涵體形式存在時，建議在加入溶菌酶和DNaseⅠ。

3.  如果在提取純化過表達(dá)蛋白的過程中，得到的部分蛋白可能在沉淀中，那么目的蛋白可能以包涵體的形式存在，可使用包涵體蛋白溶解液進(jìn)行溶液，也可以優(yōu)化蛋白表達(dá)條件，增加可溶性蛋白的表達(dá)。

細(xì)菌總蛋白變性提取試劑