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人β干擾素(IFN-β)ELISA試劑盒

 干擾素不能直接滅活病毒，而是通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。干擾素首先作用于細(xì)胞的干擾素受體，經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等一系列生休過程，激活細(xì)胞基因表達(dá)多種抗病毒蛋白，實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒的抑制作用?？共《镜鞍字饕?′-5′A合成酶和蛋白激酶等。前者降解病毒mRNA、后者抑制病毒多肽鏈的合成，使病毒復(fù)制終止。干擾素的作用特點(diǎn)：①間接性：通過誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白等效應(yīng)分子抑制病毒。②廣譜性：抗病毒蛋白是一類酶類，作用無特異性。對(duì)多數(shù)病毒均有一定抑制作用。③種屬特異性：一般在同種細(xì)胞中活性高，對(duì)異種細(xì)胞無活性。④發(fā)揮作用迅速：干擾素既能中斷受染細(xì)胞的病毒感染又能限制病毒擴(kuò)散。在感染的起始階段，體液免疫和細(xì)胞免疫發(fā)生作用之前，干擾素發(fā)揮重要作用。

β干擾素是一種重要的I型干擾素,主要是由成纖維細(xì)胞、白細(xì)胞在病毒核酸、多聚肌苷酸多聚胞苷酸(Poly IC)等干擾素誘生物質(zhì)刺激下所分泌的一種糖蛋白。與α干擾素相似,β干擾素不僅在抗病毒固有免疫過程中發(fā)揮著重要作用,而且具有抗腫瘤、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)等功能.

β干擾素是一種重要的I型干擾素，它是由成纖維細(xì)胞和白細(xì)胞所分泌的一種糖蛋白，在固有免疫和適應(yīng)性免疫中起著重要的作用。

人β干擾素(IFN-β)ELISA試劑盒

β干擾素(IFN-β)是一種在抗病毒固有免疫應(yīng)答過程中具有重要作用的細(xì)胞因子,而肝細(xì)胞作為肝炎病毒的宿主細(xì)胞被認(rèn)為具有IFN-β誘生的能力。

選用畢赤酵母GS115為宿主,利用營養(yǎng)缺陷型、抗生素G418和免疫斑點(diǎn)法的組合篩選得到的轉(zhuǎn)化子產(chǎn)量高達(dá)180 mg/L。經(jīng)Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,表達(dá)出的融合蛋白在結(jié)構(gòu)上符合我們的要求。經(jīng)過對(duì)菌株的搖瓶表達(dá)條件優(yōu)化,利用有機(jī)培養(yǎng)基,接種、培養(yǎng)至36 h后轉(zhuǎn)入pH6.0、甲醇濃度2%、誘導(dǎo)濃縮比3:1的條件下誘導(dǎo)表達(dá),可得到218 mg/L的表達(dá)量。在5 L發(fā)酵罐的放大試驗(yàn)中,當(dāng)發(fā)酵至100 h時(shí)菌濃和產(chǎn)量均達(dá)到zui高值,菌濃A600為350,表達(dá)量為500 mg/L。經(jīng)過對(duì)于融合蛋白IFNβ-HSA的初步純化條件的摸索,對(duì)其吸附、解吸附行為的規(guī)律有了進(jìn)一步的了解。進(jìn)而制定了新的純化工藝,經(jīng)過超濾濃縮、染料親和層析、鎳離子螯合親和層析、陰離子交換層析幾步分離得到了純度大于95%的目的蛋白純品,總回收率達(dá)到17%。

與Huh7和HepG2細(xì)胞相比,PH5CH8細(xì)胞經(jīng)NDV與poly(I∶C)誘導(dǎo)可產(chǎn)生高水平的IFN-β。進(jìn)一步利用蛋白免疫印跡法比較3株細(xì)胞系內(nèi)IFN-β誘生信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與PH5CH8細(xì)胞相比,Huh7和HepG2細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)蛋白的表達(dá)水平偏低。

人β干擾素-人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HAS)的前研究,本研究采用免疫學(xué)方法對(duì)畢赤酵母轉(zhuǎn)化子進(jìn)行篩選,得到高產(chǎn)菌株8株。在5L發(fā)酵罐上對(duì)高產(chǎn)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)量達(dá)500mg/L。發(fā)酵液經(jīng)超濾濃縮、染料親和層析、鎳離子螯合親和層析和DEAE離子交換層析純化后,融合蛋白純度達(dá)到96%。Westernblotting雜交表明融合蛋白具有人血清白蛋白和人β干擾素的抗原性,細(xì)胞病變抑制法測(cè)定IFNβ-HSA比活性為1.96×107IU/mg。建立了融合蛋白的生物試劑工藝,為IFNβ-HSA的前研究奠定了基礎(chǔ)。 

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